Материалы и методы исследования

Для экспериментов была взята нефть Барсуковского месторождения из Ямало-Ненецкого АО, доставленная сотрудником нефтедобывающего предприятия Н.Б. Новожиловым. По его устному сообщению нефть имеет плотность 0,85 кг/м³, парафины составляют 3,3%, смолы 4,4%, асфальтены 1,2%, сера 0,4%. До постановки экспериментов нефть около года хранилась в лаборатории.

Изучение фито - и цитотоксичности воды, загрязненной нефтью, проводили на корешках проростков лука (Allium sepa L) сорта Стригуновский. Проращивали семена в чашках Петри на двух слоях фильтровальной бумаги. Повторность трехкратная. В каждой чашке Петри размещали по 25 семян лука. В контроле использована водопроводная вода. Был приготовлен эмульсионный раствор нефти трех различных концентраций: 0, 05 %, 0, 5 % и 3%. Высевание было произведено 26.11.09. Проращивали в течение 5 дней.

Учет всхожести и измерение длины корешков лука были произведены 30.11.09. Измерение проводили с помощью штангенциркуля.

Изучение митотической активности меристематических клеток корня проводилось на временных давленых препаратах корешков лука. Для этого 01.12.09 утром была произведена фиксация корешков лука, достигших 10 мм длины. Утренняя фиксация более целесообразна, так как митоз чаще происходит в утренние часы. Сначала корешки лука поместили в фиксатор Кларка (уксусный алкоголь). Затем через 2 часа корешки поместили в этиловый спирт для хранения.

Потом корешки помещали на предметное стекло и окрашивали ацетокармином. Для его приготовления использован следующий метод.

Растворяют 2-4 г кармина - красящего вещества, состоящего из карминовой кислоты, в 45 мл ледяной уксусной кислоты и 55 мл дистиллированной воды. Растворение ведут в колбе с обратным холодильником на водяной бане с подогревом около 3 ч. После остывания темно-красный раствор кармина фильтруют и помещают в посуду с притертой крышкой. Для работы его наливают в капельницы (Паушева З.П., 1988).

Далее стекло с корешком в ацетокармине нагревали на спиртовке. Время, необходимое для оптимального окрашивания, определяли опытным путем. Затем корешок закрывали сверху покровным стеклом и осторожно раздавливали с помощью препаровальной иглы так, чтобы клетки расположились в один слой (Паушева З.П., 1988).

Затем препараты рассматривали под микроскопом с увеличением 40x и 100x, в произвольных областях из зоны деления подсчитывали общее число клеток и число делящихся. Всего рассмотрено по три корешка из каждого варианта опыта, в том числе из контроля. В каждом корешке подсчитано по 100 клеток из области зоны деления. Также были сделаны фотографии групп клеток. Рассматривали и фотографировали с помощью светового микроскопа OLIMPUS BX 51 с системой визуализации изображения (видеокамера OLIMPUS DP 71, программа Cell_b) на кафедре ботаники и генетики ПГУ.

Митотический индекс рассчитывали согласно рекомендациям З.П. Паушевой (1988) как отношение числа делящихся клеток к общему числу исследованных, выраженное в промилле.

Эксперимент по влиянию нефтяного загрязнения почвы на развитие проростков пшеницы выполнен с дерново-луговой почвой, доставленной из заказника "Предуралье" Кишертского района Пермского края. Огородная почва с пойменного участка, имеет темный цвет, рыхлая. По данным учащейся лицея М. Ременниковой в 2006 году такая почва имела следующие характеристики: слабокислую реакцию среды, низкое содержание подвижного фосфора, высокую гумусированность (табл.1).

Таблица 1

Агрохимические показатели почвы

Эксперимент проведен на основе метода проростков для исследования фитотоксичности почв, предложенного Д.С. Орловым с соавторами (2002). В качестве тестового объекта служила пшеница сорта Иргина.

Еще статьи

Комплексное управление отходами предприятия на примере асфальтобетонного завода №1 ОАО КДБ
Дорожное строительство является ведущей отраслью народного хозяйства. Эта область имеет высокие темпы роста, в связи с чем становится одним из главных источников антропогенного загрязнения. Современная жизнь немыслима без дорог и автомобильного транспорта. Автомоб ...